定量PCR較半定量準(zhǔn)確，可實(shí)時(shí)定量。理論上有1個(gè)copy的差別就能區(qū)分開。如果你只想看看大致趨勢(shì)，半定量不失為一種快速的方法?，F(xiàn)在一些高級(jí)別的刊物上還有半定量的結(jié)果，如plant cell, plant physiology, genome biology等。

    半定量反轉(zhuǎn)錄－聚合酶鏈反應(yīng)（semi-quantitatie reerse transcription and polymerase Chain reaction ,SqRT-PCR）是近年來常用的一種簡(jiǎn)捷、特異的定量RNA測(cè)定方法，通過mRNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，再進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并測(cè)定PCR產(chǎn)物的數(shù)量，可以推測(cè)樣品中特異mRNA的相對(duì)數(shù)量。以半定量RT-PCR為基礎(chǔ)建立起來的mRNA含量測(cè)定技術(shù)，較含內(nèi)標(biāo)化的RT-PCR定量測(cè)定的mRNA的方法更為簡(jiǎn)便可行。這種方法不另設(shè)‘內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)',排除了倆對(duì)不同引物之間的相互抑制和靈敏讀差異，而且具有明顯的劑量－效益關(guān)系和良好的重復(fù)性。
 

    步驟，1。抽提RNA，2。反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，3。以cDNA為模板做PCR!

    注意：步驟1，RNA抽提質(zhì)量一定要好，注意污染。內(nèi)參的選擇，常用的有βactin和GAPDH倆中。步驟3，半定量RT-PCR應(yīng)該再兩管中進(jìn)行，既內(nèi)參和目的基因各一管，這樣便于控制，做圖的時(shí)候可以放在一各泳道里跑！指數(shù)期和平臺(tái)期一定要摸清楚！

    定量ＲＴ－ＰＣＲ（quantitatie reerse transcription and polymerase Chain reaction ,qRT-PCR）是在用一步法或兩步法，在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。有相對(duì)定量和定量?jī)煞N分析方法，定量的目的是測(cè)定目的基因在樣本中的分子數(shù)目，即通常所說的拷貝數(shù)。相對(duì)定量的目的是測(cè)定目的基因在兩個(gè)或多個(gè)樣本中的含量的相對(duì)比例，而不需要知道它們?cè)诿總€(gè)樣本中的拷貝數(shù)。另外，與傳統(tǒng)的PCR技術(shù)相比，Real-time Q-PCR的不足之處是：（1）由于運(yùn)用了封閉的檢測(cè)，減少了擴(kuò)增后電泳的檢測(cè)步驟，因此也就不能監(jiān)測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物的大??；（2）因?yàn)闊晒馑胤N類以及檢測(cè)光源的局限性，從而相對(duì)地限制了real-time Q-PCR的復(fù)合式（multiplex）檢測(cè)的應(yīng)用能力；（3）目前real-time Q-PCR實(shí)驗(yàn)成本比較高，從而也限制了其廣泛的應(yīng)用。